沉淀反应
(precipitation)一种血清学反应。可溶性抗原与相应抗体结合,在有适量电介质存在下,经过一定时间,形成肉眼可见的沉淀物。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。同相应抗体比较,抗原的分子小,单位体积内含有的抗原量多,做定量试验时,为了不使抗原过剩,应稀释抗原,并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。习惯上将参与沉淀反应的抗原称为沉淀原,抗体称沉淀素。沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。
环状沉淀反应 又称环状试验。主要用于抗原的定性试验。用已知抗体来检测未知抗原。在小口径试管中先加入已知抗血清,然后将待检抗原小心地加在血清的表面,成为界面清晰的两层。数分钟后,两界面交界处出现白色沉淀环,为阳性反应。本试验常用做抗原定性,如炭疽的诊断(Ascoli 氏试验)、鉴别血迹、媒介昆虫的嗜血性等。
絮状沉淀反应 将抗原与相应抗体在试管内或凹玻片上混匀,如出现肉眼可见的絮状沉淀物,为阳性反应。如诊断梅毒的康氏反应(Kahntest)。琼脂扩散试验 利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散,若抗
原与抗体对应,并且比例适当,就会出现白色沉淀线,此为阳性反应。琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行。又可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验两类。
单向琼脂扩散试验 是一种常用的定量检测抗原的方法。将适量抗体与琼脂混匀,浇注成板,凝固后,在板上打孔,孔中加入抗原,抗原就会向孔的四周扩散,边扩散边与琼脂中的抗体结合。一定时间后,在两者比例适当处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线,则从曲线中可求出标本中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量,敏感性很高。
双向琼脂扩散试验 是将半固体琼脂倾注于平皿内或玻片上,待其凝固后,在琼脂板上打孔,将抗原、抗体分别注入小孔内,使两者相互扩散。如果抗原、抗体相互对应,浓度、比例适当,则一定时间后,在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原。一对抗原、抗体系统只能形成一条沉淀线,不同的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度不同,可在琼脂中形成不同的沉淀线。本法主要是用于检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺点是需要时间过长, 灵敏度不高。
双向琼脂扩散示意图