切片

样品块的修整 修块的目的是除去组织周围多余的包埋介质，一般将样品块修成梯形，然后再在修好的块面上修成一个面积为 0.1×0.5 毫米，高 30～ 50 微米的小台，然后进行切片。

铜网的选择与清洗 一般选用国产的 230 目、280 目铜网。新铜网用乙醇清洗，干燥备用。铜网一般要制备载膜，有的亦可直接捞片。

载膜制备 一般制福尔瓦膜，用聚乙烯醇缩甲醛（polyvinylformal，PVF） 0.25～0.3 克，用三氯甲烷配成 0.25～0.3％PVF 液，备用。将 PVF 液倒入量筒，高度约为载片长的 2/3。将载玻片在此液内浸 2～3 次，再在液面上停留1～2 分钟，使膜平整。膜自然干燥后，用刀片划切四周，将玻片垂直浸入已备好的平皿水中，膜即漂浮于水面（图 1）。将洁净铜网正面朝下摆在膜上， 将滤纸盖于膜上，迅速翻转，此时载网紧贴滤纸，膜在载网上。放干燥器中备用。

玻璃刀及水槽的制备 用制刀机制成三角形的刀。为使超薄切片漂浮在一个液体表面上，刀上应装一个不漏水的水槽。可用已成型的金属或塑料水槽， 周围用蜡焊封。用胶带作水槽，将胶带粘贴在玻璃刀刀刃可用部的一边，胶带底边与刀背面垂直，顶面勿高于刀刃，把另一端同样贴于刀的另一边。贴好后在四周接缝处用牙科蜡涂封，以妨漏水。（图 2）。

切片操作 一般用热胀式切片机，先安装样品包埋块，将修好的样品夹于样品夹内，将样品夹固定于样品定向头。将作为水槽的玻璃刀安到刀架上， 刀要与参照规在一个平面与高度上。对准样品块与刀刃，使块面两个平行边与刀刃平行，选择好的刀刃作切刃。调节水槽液面，用蒸馏水作水槽液，在荧光灯下调出银白色反射。依此背景，可看到切片颜色因切片厚度不同而各异。

当样品与刀对准后，小心进刀。得到满意切片时，进行捞片，将切片安放在载网上。切片的实际厚度，从片子在水面的干涉色估计。

干涉色 厚度

暗灰色 ＜400 埃

灰色 400～500 埃

银色 500～700 埃

金色 700～900 埃

紫色 800～1500 埃

切片的安放 切好片后，在显微镜下，用眉针将理想的片子拨向水槽中间，用镊子夹住带膜的铜网，膜向下，水平地接近切片带后，将铜网迅速反转，切片便沾在载网上了，即沾片。也可把铜网水平地置于切片下方，载膜向上，轻提铜网，切片捞在载网上即捞片。将此载网放在铺好滤纸的平皿上， 有切片面朝上。

染色 可用块染或载网染，下面介绍载网染色。

把一张滤纸平铺在有盖平皿底部。用配制染剂的溶液将其润湿，上放一小片干净牙科蜡。将染液滴于蜡块上，迅速盖上平皿盖。将欲染载网浮在液滴上，注意切片朝下。一般采用铀-铅双染法：先用 1～3％醋酸双氧铀水溶液或 70％酒精溶液将载网按上述方法染 20～30 分钟。染后必须清洗，一般用钟表镊子夹载网浸入清洗液中，反复清洗，清洗液可放在试管中或小瓶中。经三瓶清洗液即可。注意将镊子中间夹缝液体用一小片滤纸将其吸干。用硝酸铅与柠檬酸钠配制成柠檬酸铅，将其溶于氢氧化钠，可得到稳定的强碱溶液（pH12）。染、洗方法同前。用铅染时，可用 0.1MNaOH 浸湿滤纸，以吸收空气中 CO2，防止生成碳酸铅沉淀污染切片。或将 NaOH 放在牙科蜡周围。配制染液用的蒸馏水应煮沸 10 分钟以驱除 CO2，染毕，用 0.02NNaOH 和无 CO2 蒸馏水连续冲洗以除去载网上多余染液，载网清洗后置于培养皿的滤纸上干燥。

最后，将染好的干燥切片放入超薄切片盒内，以备在电镜下观察。

附 ： Hanks 液 配 制 法

应用液 贮存液（用时稀释 10 倍）

NaCl 8 克 40 克

KCl 0.4 克 2 克

MgSO4 · 7H2O 0.2 克（另溶） 1 克NaH2PO4 · 12H2O 0.12 克 0.6 克

用 0.7％NaHCO3 调 pH 至 7.2～7.4