基本原理

应用寡聚核苷酸进行 DNA 的定点诱变时，首先要把含有待突变的 DNA 片段克隆到 M13 噬菌体载体中。M13 噬菌体的正链可以感染具有性纤毛的细菌，并在菌体内进行复制后，以出芽的形式形成新的带有正链 DNA 的噬菌体。而存留在菌体内的则是双链状态的复制型 M13。受 M13 噬菌体感染的细菌生长速度减慢，在细菌培养皿上会形成较透明的噬菌斑。

将目的 DNA 插入到复制型 M13 的多克隆位点上（图 2），去转染细菌， 提取单链 DNA 作为突变的模板。根据需要设计并合成带有突变核苷酸序列的寡聚核苷酸引物，使之与带有目的 DNA 的单链 M13 模板杂交，然后加入 DNA 聚合酶和 4 种脱氧核糖核苷酸，使杂交上的突变引物延伸，并用 DNA 连接酶使新合成的 DNA 成环状，再去转染细菌。可用 DNA 序列分析的方法从得到的噬菌体中筛选出带有突变 DNA 序列的突变体。在制备出含有突变体的复制型 DNA 后，可以用突变的 DNA 片段置换未突变的 DNA 相应的区段，从而得到完整的 DNA 突变体。