二、常用培养基配方及其特点
- 常用培养基配方
组织培养是否成功,在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点,适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时,应对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表 9-1。
培养基中的激素种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料而有变化,
因此各配方中均不列入。
- 几种常用培养基的特点
- MS 培养基。 MS 培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不致影响离子间的平衡。MS 固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此,一般情况下,无表 9—1 植物组织
培养常用培养基配方
(单位:毫克/升)
培养基名称 成分 |
MS |
H |
B5 |
尼许 |
怀特 |
N6 | |
---|---|---|---|---|---|---|---|
大量元素 |
NH4NO3 |
1650 |
720 |
||||
(NH4)2SO4 |
134 | 463 | |||||
KNO3 |
1900 |
950 |
2500 |
125 |
80 |
2830 | |
Ca(NO3)2 · 4H2O |
500 |
300 |
|||||
CaCl2 · ZH2O |
440 |
166 |
150 | 166 | |||
MgSO4 · 7H2O |
370 |
185 |
250 |
125 |
720 |
185 | |
KH2PO4 |
170 |
68 |
125 |
400 | |||
Na2SO4 |
200 |
||||||
NaH2PO4 · H2O |
150 |
16.5 |
|||||
KCl |
65 |
||||||
微量元素 |
KI |
0.83 |
0.75 | 0.8 | |||
H3BO3 |
10 |
3 |
0.5 |
1.5 |
1.6 | ||
MnSO4 · H2O |
10 |
||||||
MnSO4 · 4H2O |
22.3 |
25 |
3 | 7 | 4.4 | ||
MoO3 |
0.0001 |
||||||
ZnSO4 · 7H2O |
8.6 |
10 |
2 |
0.05 |
3 | 1.5 | |
Na2MoO4 · 2H2O |
0.25 |
0.25 | 0.25 |
0.025 |
|||
CuSQ4 · 5H2O |
0.025 |
0.025 | 0.025 |
0.001 |
|||
CoCl2 · 6H2O |
0.025 |
0.025 | |||||
有机 |
甘氨酸 |
2 | 2 | 3 | 2 | ||
盐酸硫胺素 |
0.4 |
0.5 |
10 |
0.1 |
1 | ||
盐酸咝哆素 |
0.5 |
0.5 |
1 |
0.1 |
0.5 | ||
菸酸 |
0.5 |
0.5 |
1 |
0.3 |
0.5 |
续表
培养基名称成分 |
MS |
H |
B5 |
尼许 |
怀特 |
N6 |
|
---|---|---|---|---|---|---|---|
成分 |
肌醇 |
100 |
100 |
100 |
100 |
||
叶酸 |
0.5 |
||||||
生物素 |
0.5 |
||||||
蔗糖 |
30000 |
20000 |
20000 |
20000 |
20000 |
50000 |
|
琼脂 |
10000 |
8000 |
10000 |
10000 |
10000 |
10000 |
|
PH |
5.8 |
5.5 |
5.5 |
6.0 |
5.6 |
5.8 |
说明:表中各培养基配方中,均未列出铁盐。关于铁盐配方,除尼许培养基为柠檬酸铁 10 毫克/升外,其余均为:5.57 克的 FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)和 7.45 克的 Na2-EDTA(乙胺四乙酸二钠)溶于 1 升水的溶液,5 毫升/ 升。
须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比,MS 培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的明显特点。
-
B5 培养基。B5 培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。经过试验发现,有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在 MS 培养基上生长得比 B5 培养基上要好,而另一些植物,在 B5 培养基上更适宜。
-
N6 培养基。N6 培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养,在
国内外得到广泛应用。在组织培养中,经常采用的还有怀特(While,1963) 培养基、尼许(Nitsch,1951)培养基等。它们在基本成分上大同小异。怀特培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。