二、常用培养基配方及其特点

  1. 常用培养基配方

组织培养是否成功,在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点,适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时,应对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表 9-1。

培养基中的激素种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料而有变化,

因此各配方中均不列入。

  1. 几种常用培养基的特点
  1. MS 培养基。 MS 培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不致影响离子间的平衡。MS 固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此,一般情况下,无表 9—1 植物组织

培养常用培养基配方

(单位:毫克/升)

培养基名称

成分

MS

H

B5

尼许

怀特

N6

大量元素

NH4NO3

1650

720

(NH4)2SO4

134 463

KNO3

1900

950

2500

125

80

2830

Ca(NO3)2 · 4H2O

500

300

CaCl2 · ZH2O

440

166

150 166

MgSO4 · 7H2O

370

185

250

125

720

185

KH2PO4

170

68

125

400

Na2SO4

200

NaH2PO4 · H2O

150

16.5

KCl

65

微量元素

KI

0.83

0.75 0.8

H3BO3

10

3

0.5

1.5

1.6

MnSO4 · H2O

10

MnSO4 · 4H2O

22.3

25

3 7 4.4

MoO3

0.0001

ZnSO4 · 7H2O

8.6

10

2

0.05

3 1.5

Na2MoO4 · 2H2O

0.25

0.25 0.25

0.025

CuSQ4 · 5H2O

0.025

0.025 0.025

0.001

CoCl2 · 6H2O

0.025

0.025

有机

甘氨酸

2 2 3 2

盐酸硫胺素

0.4

0.5

10

0.1

1

盐酸咝哆素

0.5

0.5

1

0.1

0.5

菸酸

0.5

0.5

1

0.3

0.5

续表

培养基名称成分

MS

H

B5

尼许

怀特

N6

成分

肌醇

100

100

100

100

叶酸

0.5

生物素

0.5

蔗糖

30000

20000

20000

20000

20000

50000

琼脂

10000

8000

10000

10000

10000

10000

PH

5.8

5.5

5.5

6.0

5.6

5.8

说明:表中各培养基配方中,均未列出铁盐。关于铁盐配方,除尼许培养基为柠檬酸铁 10 毫克/升外,其余均为:5.57 克的 FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)和 7.45 克的 Na2-EDTA(乙胺四乙酸二钠)溶于 1 升水的溶液,5 毫升/ 升。

须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比,MS 培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的明显特点。

  1. B5 培养基。B5 培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。经过试验发现,有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在 MS 培养基上生长得比 B5 培养基上要好,而另一些植物,在 B5 培养基上更适宜。

  2. N6 培养基。N6 培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养,在

国内外得到广泛应用。在组织培养中,经常采用的还有怀特(While,1963) 培养基、尼许(Nitsch,1951)培养基等。它们在基本成分上大同小异。怀特培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。