三、培养液的配制

1. 制备母液

为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量 10 倍、100 倍或 1000 倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的 1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。

1. 大量元素。大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。制备时， 按表中排列的顺序，以其 10 倍的用量，分别称出并进行溶解，以后按顺序混

在一起，最后加蒸馏水，使其总量达到 1 升，此即大量元素母液。

1. 微量元素。因用量少，为称量方便和精确起见，应配成 100 倍或 1000

倍的母液。配制时，每种化合物的量加大 100 倍或 1000 倍，逐次溶解并混在一起，制成微量元素母液。

1. 铁盐。铁盐要单独配制。由硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）5.57 克和乙二胺四乙酸二钠（Na—EDTA）7.45 克溶于 1 升水中配成。每配 1 升培养基，加

铁盐 5 毫升。

1. 有机物质。主要指氨基酸和维生素类物质。它们都是分别称量，分别配成所需的浓度（0.1～1.0 毫克/毫升），用时按培养基配方中要求的量分别加入。

2. 植物激素。最常用的有生长素和细胞分裂素。这类物质使用浓度很低，一般为 0.01～10 毫克/升。可按用量的 100 倍或 1000 倍配制母液，配制时要单个称量，分别贮藏。

配制植物生长素时，应先按要求浓度称好药品，置于小烧杯或容量瓶中，用 1～2 毫升 0.1N（克当量浓度）氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。配制细胞分裂素时，应先用少量 0.5 或 1N 的盐酸溶解，然后加蒸馏水至所需量。

以上各种混合液（母液）或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉。至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。

1. 配制培养基的具体操作

①根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量， 放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。

②将①中称好的琼脂加蒸馏水 300～400 毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。

③将①中所取的各种物质（包括蔗糖），加入煮好的琼脂中，再加水至1000 毫升，搅拌均匀，配成培养基。

④用 1N 的氢氧化钠或盐酸，滴入③中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用 pH 试纸测其 pH 值，直到将培养基的 pH 值调到 5.8。

⑤将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶（或试管）中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码。瓶中培养基的量约为容量的 1/4 或 1/5。

表 9－2 配制培养基成分单

培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚。配制时， 按表列内容顺序，按项按量称取，就不会出现差错。成分单的格式与内容见表 9－2。

1. 培养基的灭菌与保存

培养基配制完毕后，应立即灭菌。培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内， 在汽相 120℃条件下，灭菌 20 分钟。如果没有高压蒸汽灭菌锅，也可采用间歇灭菌法进行灭菌，即将培养基煮沸 10 分钟，24 小时后再煮沸 20 分钟，如此连续灭菌三次，即可达到完全灭菌的目的。

经过灭菌的培养基应置于 10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在 4～5℃低温下保存要更好些。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月。在多数情况下， 应在消毒后两周内用完。