一、分离的基本方法

微生物分离的方法很多，主要有连续稀释分离法，平板划线分离法和单细胞分离法等方法。其中，单细胞分离法需要贵重精密仪器，中学无法开展，而连续稀释分离法和平板划线分离法却简便易行，中学完全具备开展条件。现将这两种方法说明如下。

①取 1 克土样，在火焰旁放入装有 99 毫克无菌水的锥形瓶内，充分摇匀，将菌分散。

②用移液管吸取上述菌悬液 1 毫升，放入盛有 9 毫升无菌水的试管中，

并进一步稀释成 1000 倍，即 10-3 的菌悬液。按 10 倍稀释法连续稀释到 10-8

（每 1 次稀释，都须更换移液管）。

③取 3 支 1 毫升移液管分别从 10-8、10-7、10-6 菌悬液中吸取 1 毫升菌悬液，分别注入编号 10-8、10-7 和 10-6 的培养皿内，同一稀释液重复做 3 个培养皿。

④将温度为 45～50℃的营养琼脂培养基（其成分和配制方法见本章第三节）倒入上述各培养皿内，轻轻旋转使菌悬液充分混合均匀，凝固后，将培养皿倒扣放置在温暖处（28℃左右），每天观察培养基表面有无微生物菌落。

⑤经过一定时间培养后，培养基上长出菌落，根据菌落特征，初步判断属于何种类型的微生物，并在显微镜下检查，若菌体形态一致，则可认为是初步分离到纯菌种。

⑥将分离培养所得的纯菌种，从平板培养基转移到试管斜面培养基上培

养。

①取 1 克土样，在火焰旁加进装有 99 毫升无菌水的锥形瓶中，堵塞棉

塞，制成菌悬液待用。

②取一培养皿置于实验台上，左手将培养皿打开稍许，向培养皿内注入熔化的营养固体培养基 10～12 毫升，轻轻转动培养皿，使其中的培养基分布均匀，平放桌上，使其凝成平板。然后在皿底用蜡笔划分 A、B、C、D 几个区。应连续制作几份平板培养基。

③将培养皿底部用姆指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第 1 次平行划线 6～7 条，转动培养皿约 70°

角，用烧过冷却的接种针，通过第 1 次划线部分作第 2 次平行划线，然后再

用同样方法，作第 3 次平行划线。划线时，应使平板培养基表面向下，以免空气中杂菌落入。接种针应与平板表面成 30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。

④将划线后的培养皿倒放在 28℃左右的温暖处进行培养，待长出菌落后，鉴定微生物类群，并根据镜检结果，判断是否已分离到了纯菌种。如果菌种很纯，则可转移到斜面培养基上进一步培养。

连续稀释分离法和平板划线法，均须在无菌室或接种箱内进行。