实验 16 血细胞的计数

【目的要求】

学习红细胞、白细胞计数的方法。

【基本原理】

血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将所得结果换算为 1mm3 血液中的血细胞个数。

【动物与器材】

兔、血细胞计数板、血红蛋白吸管、1ml 和 5ml 吸管、表面皿、显微镜、刺血针、酒精棉球、红细胞稀释液、白细胞稀释液、95%酒精、乙醚、1%氨水。

【方法与步骤】

1．采血及稀释用 1ml 吸管吸取 0.38ml 白细胞稀释液放入表面皿内备用，另用 5ml 吸管吸取 3.98ml 红细胞稀释液放入表面皿内备用。

用酒精棉球消毒兔的耳缘静脉采血部位，用刺血针刺破血管，让血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血时，用血红蛋白吸血管吸血至刻度20mm3 处，将血液吹入盛有白细胞稀释液的表面皿内，吸上清液冲洗沾在管壁上的血液。立即将吸管洗净和干燥备用。再用同样方法吸取血液至刻度 20mm3 处，并将血液吹入盛有红细胞稀释液的表面皿内，轻轻摇匀。2．血细胞计数板的结构计数板是一块特制的长方形厚玻璃板，板面的中部有 4 条直槽，内侧两槽中间有一条横槽把中部隔成二长方形的平台（图 3-3）。此平台比整个玻璃板的平面低 0.1mm，当放上盖玻片后，平台与盖玻片之间距离（即高度）为 0.1mm。平台中心部分各以 3mm 长，3mm 宽精确划分为 9 个大方格，称为计数室（图 3-4），每个大方格面积为 1mm3，体积为 0.1mm3。四角的大方格，又各分为 16 个中方格，适用于白细胞计数。中央的大方格则由双线划分为 25 个中方格，每个中方格面积为 0.04mm3，体积为 0.004mm3。每个中方格又各分成 16 个小方格，适用于红细胞计数。

稀释后的血液滴入计数室前将表面皿摇振 1-2min。将盖玻片放在计数板正中，用小吸管吸取摇匀的稀释血液，将一小滴血液滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象而自动流入计数室内。如滴入过多，溢出并流入两侧深槽内，使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸片把多余的溶液吸出，以深槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少，经多次充液，易造成气泡，应洗净计数室，干燥后重做。红细胞和白细胞的计数，各使用一计数室。

3．计数血液稀释液滴入计数室后，须静置 2-3min，然后在低倍显微镜下计数。计数白细胞时，数四角 4 个大方格的白细胞总数；计数红细胞时，

数中央大方格的四角的 4 个中方格和中央的一个中方格（共 5 个中方格）的红细胞总数。计数时应循一定的路径，对横跨刻度上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数（图 3-5）。计数白细胞时，如发现各大格的白细胞数目相差 8 个以上；计数红细胞时，如各中方格的红细胞数

目相差 20 个以上，表示血细胞分布不均匀，必须把稀释液摇匀后重新计数。4．计算

白细胞数：将 4 个大方格内数得白细胞总数乘以 50，即得每 mm3 血内的白细胞总数，因为：

(1)稀释液 0.38ml 加入血 20mm3（1ml=1cm3=1000mm3，故 20mm3=0.02ml），使血液稀释 20 倍，换算成未稀释血时应乘以 20。

(2)计数四角上 4 个大方格内的白细胞总数，其容积为 1×1×0.1×

4=0.4mm3。换算成每 mm3 时应乘以 2.5。这样把 4 个大方格内数得的白细胞总数乘以 50（即 20×2.5=50）即为每 mm3 血内的白细胞总数。

红细胞数：将中央大方格中的 5 个中方格内数得的红细胞总数乘以 10， 000，即得每 mm3 血内红细胞总数。因为：

稀释液 3.98ml 加入血 20mm3（即 0.02ml），使血液稀释 200 倍，换算成未稀释血要乘以 200。
在计数室内只计数 0.02mm3 （即 1 个中方格的容积为 0.2×0.2× 0.1=0.004mm3，5

个中方格的容积为 0.004×5=0.02mm3），换算成每 mm3 时应乘以 50。

这样把 5 个中方格内数得的红细胞总数乘以 10，000（即 200×50=10， 000）即得每 mm3 血液内的红细胞总数。

【思考题】

小结在操作过程中，哪些因素可能影响计数的准确性？