二、活体解剖技术

(一)动物的选择 常用的实验动物有狗、猫、兔、大白鼠、小白鼠、豚鼠、鸽、鸭、蟾蜍或蛙等。无论选用哪种动物,均需健康。一般地说,健康的哺乳动物毛色光泽,两眼明亮、眼和鼻无分泌物、鼻端潮而凉、反应灵活、食欲良好。健康的蛙或蟾蜍则皮肤湿润、喜爱活动,静止时后肢蹲坐、前肢支撑、头部和躯干挺起等。

动物种类的选择需根据实验内容而定,使其解剖和生理特点适合于预定实验的要求。如研究主动脉弓减压神经传入冲动的作用时,常选用兔作为实验对象,因为兔的减压神经在颈部自成一束,与迷走神经伴行,易于寻找和分离。在研究心脏特殊传导组织的电活动时,常选用狗的浦肯野氏纤维及兔的窦房结作为实验材料,因为狗的浦肯野氏纤维在心室内较为粗大,很容易解剖分离。此外,动物的选择还需考虑当地实验动物的多寡、供需状况等, 如澳大利亚常选用绵羊作为实验对象;在美国学生的实验中,常选用乌龟, 而我国则多选用蟾蜍。在生理学的研究中,特别是基础理论研究中,合理地选择实验动物,常常是实验成败的关键,但并非愈是高等动物愈好。在选择实验动物时,应根据实验需要,因地制宜地加以考虑。

(二)动物的麻醉 在慢性实验或急性在体实验中,施行手术之前必须将动物麻醉。麻醉可使动物在手术或实验过程中减少疼痛,保持安静,保证实验的顺利进行。麻醉剂的种类繁多,作用原理不尽相同。除了麻痹中枢神经系统以外,还会引起其它生理机能的变化,因此,在应用时需根据动物的种类以及实验或手术的性质慎重加以选择。麻醉必须适度,过深或过浅均会给手术或实验带来不良影响。麻醉的深浅可从呼吸,某些反射的消失,肌肉的紧张程度和瞳孔的大小加以判断。人们常用刺激角膜以观察角膜反射,夹捏后肢股部肌肉以观察其反应的简易方法了解动物的麻醉深度。适宜的麻醉状态是呼吸深慢而平稳,角膜反射与运动反应消失,肌肉松弛。

  1. 常用麻醉剂的种类及用法 麻醉剂可分为局部麻醉剂和全身麻醉剂两种。局部麻醉剂常用 0.5—1.0% 盐酸普鲁卡因或 2%盐酸可卡因作皮肤或粘膜表面麻醉。在生理实验中,多采用全身麻醉剂,如挥发性的乙醚、氟烷和非

挥发性的巴比妥类、氨基甲酸乙酯等,以下分别加以介绍。

  1. 乙醚(ether)是一种呼吸性麻醉剂,适用于各种实验动物。在用乙醚麻醉猫、兔、或鼠类时,可将动物放在特制的玻璃钟罩内,同时放入浸有乙醚的脱脂棉,动物在吸入后的 15—20min 开始发挥作用。在麻醉狗时, 可用特制的麻醉口罩套在动物嘴上,慢慢将乙醚滴在口罩上进行麻醉。麻醉时需注意动物的保定(下述)。

乙醚对呼吸道有刺激粘液分泌的作用,为防止呼吸道堵塞,可用硫酸阿托品(0.1—0.3mg/kg 体重)皮下或肌肉注射。

乙醚麻醉易于掌握,比较安全,作用时间短,麻醉后容易苏醒;但要专人管理麻醉,以防过早苏醒或麻醉过量。

  1. 戊巴比妥纳(pentobarbital sodium)适用于各类实验动物。常配制成 5%的水溶液,一般由静脉或腹腔注射。戊巴比妥钠作用开始快,一次给药的麻醉有效时间约 2—4h,不需要特殊照顾。如在实验中需要补充注射时, 可再由静脉注射 1/5 剂量,仍可维持 1—2h。在麻醉过量时,可产生严重的呼吸和循环抑制,导致动物的死亡。

  2. 硫喷妥纳(pentothal sodium)为淡黄色粉末,水溶液不稳定,一般需使用前配制,常用浓度为 2.5—5%,静脉注射,不宜作皮下或肌肉注射。静脉注射后作用较快,但苏醒也快,麻醉时间较短,一般约 1.5h。实验过程中可重复注射,以维持麻醉的深度。

  3. 氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate)又名乌拉坦或脲酯。氨基甲酸乙酯易溶于水,常用浓度为 20—25%。适用于多数动物:狗、猫、兔多用静脉或腹腔注射,鸟类多用肌肉注射,蛙类用皮下淋巴囊注射。

  4. 氯醛糖(chloralose)溶解度较小,常用浓度为 1%,使用前须加热促其溶解,但不可煮沸。常采用静脉或腹腔注射,可维持麻醉状态 3—4h。与氨基甲酸乙酯合并常用于电生理实验中。

非挥发性麻醉剂使用简便,维持时间较长,实验中无需专人照管,麻醉深度也较易掌握,因此为大多数实验室采用。其缺点是苏醒缓慢。

常用麻醉剂的剂量和用法见表 1-1。

  1. 麻醉剂的给药途径及方法 非挥发性麻醉剂的给药途径为注射给药法,主要有静脉、腹腔、肌肉、皮下和淋巴囊注射。
  1. 静脉注射 常用静脉注射麻醉狗、兔。狗在麻醉前必须妥善保定, 特别是生狗,以防伤人。保定的方法多为捆绑狗的嘴鼻部。即用粗棉带从下颌绕到上颌打一结,然后绕向下颌再打一结,再将棉带引至头后,在颈部背面打第三结,最后再打一活结(图 1-11)。另外,也

表 1-1 动物常用麻醉剂的剂量和用法

麻 醉 剂

动物种类

给药途径

药物浓度

剂量(mg/kg 体重)

维持时间

(h)

备 注

乙 醚

各种动物

气管吸入

/

适量

较短

乙醚对呼吸道有刺激作用,可

用阿托品皮下或肌肉注射预防

狗、猫、兔

静 脉

30

麻醉较平稳

戊巴比妥纳

狗、猫、兔

腹 腔

3 %

35

2 — 4

麻醉过量时,可用咖啡因、苯

鼠类

腹 腔

40

丙胺解救

鸟类

肌 腔

50 — 100

狗、猫、兔

静脉

1000

易溶于水

氨基甲

狗、猫、兔

腹腔

1000

对器官功能影响较小

酸乙酯

鼠类

腹腔

20 — 25 %

1000

2 — 4

鸟类

肌肉

1250

蛙类

皮下淋巴囊

2000

狗、兔

静脉

60 — 80

溶解度较低,可加温助溶,但

氯醛糖

腹腔

1 %

60 — 80

3 — 4

不可煮沸。对呼吸及血管运动

鼠类

腹腔

80 — 100

中枢影响较小

溶液不稳定,需使用前配制。

狗、猫

静脉

15 — 25

刺激性较大,不宜作皮下或肌

硫喷妥纳

静脉

2.5 — 5 %

10 — 20

0.5 — 1.5

肉注射。静脉注射对心血管及

内脏损害较小,注射宜慢以免

麻醉过深

狗、猫、兔

静脉

80 — 100

麻醉诱导期较长,深度不易控

苯巴比妥纳

狗、猫、兔

腹腔

10 %

100 — 150

24 — 72

制。不宜作血压实验。麻醉过

肌肉

300

量可用苯丙胺、四氯五四烷解

可用特制的长柄大铁钳将狗颈部钳住,钳夹后将钳头固定于墙角或地面,此时头部不能自由活动,但不影响呼吸。在狗,最常用于注射和采血的静脉为前肢内侧的头静脉和后肢小腿外

侧的小隐静脉。注射前需在注射部位剪毛,用手握压静脉向心端处,使血管充血膨胀。将注射针头顺血管方向先刺入血管旁的皮下,然后再刺入血管,此时可见回血。注射者一手固定针头,一手缓缓进行推注(图 1-12)。静脉注射兔的常用部位为耳缘静脉。兔耳的外缘血管为静脉,中央的血

管为动脉。注射

前最好将动物放入兔体固定箱内,使兔头露于箱外,以防注射时挣扎。先除去注射部位的被毛,用左手食指和中指夹住耳缘静脉近心端,使其充血(亦可用动脉夹夹住),并用左手拇指和无名指固定兔耳。用右手持注射器将针头顺血管方向刺入静脉(图 1-13),刺入后再将左手食指和中指移至针头处, 协同拇指将针头固定于静脉内,便可缓缓注射。如注射阻力过大或局部肿胀,

说明针头未刺入血管,应拔出重新刺入。首次注射应从静脉的远心端开始, 以便进行反复注射。

  1. 腹腔注射 常用腹腔注射麻醉猫和鼠类,狗、兔、鸽、蛙类也可采用。在进行猫的腹腔注射时,要紧紧抓住颈后皮肤皱襞,迅速将注射针头刺入腹腔,注射完毕后立即退出针头。猫是易发怒动物,牙、爪均可伤人,为安全计,最好将猫放入布制口袋内,封口后进行注射,其方法并不难掌握。在腹腔注射鼠类时,也需注意安全。对小白鼠可采用手持法进行注射(图1-14),即用左手小指和第四指将鼠尾夹住,迅速用其它三指抓住鼠耳及颈部皮肤,将腹部朝上,右手将注射针头刺入下腹部腹白线稍外侧处,注射针与皮肤面呈 45°夹角,若针尖通过腹肌后抵抗消失,应保持针头不动,轻轻注入麻醉剂。腹腔注射应防止把针头刺入肠、肝、膀胱等内脏器官,因此针头刺入后须轻轻回抽,如无肠内容物、尿液或血液被抽出,表明针头未刺入内脏。

  2. 肌肉注射 常用肌肉注射麻醉鸟类,注射部位多为胸肌或腓肠肌等肌肉较发达的部位。猴、狗、猫、兔多选用两侧臀部或股部进行肌肉注射。固定动物后,右手持注射器,使之与肌肉呈 60°夹角,一次刺入肌肉。注射完毕后用手轻轻按摩注射部位,帮助药液吸收。

  3. 皮下注射 在注射麻醉中并不常用。小白鼠的皮下注射通常在背部皮下,可将皮肤拉起,注射针刺入皮下。将针头轻轻向左右摇摆,容易摆动则表明已刺入皮下,然后注射药物。拔针时,可以手指轻捏注射部位,以防药液外漏。对大白鼠、豚鼠、兔、猫等可选用背部、大腿内侧或臀部等皮下脂肪较少的部位进行皮下注射。鸽通常选用翼下部位注射。(5)淋巴囊注射麻醉蛙或蟾蜍时常用淋巴囊注射。由于蛙类皮肤较薄,弹性较差,抽针后药液易自注射处外流,故采用胸部淋巴囊注射为宜。方法是将针头刺入口腔粘膜,通过下颌肌层入皮下淋巴后囊(图 1-15)再行注射。一只动物一次可注射 0.25—0.1ml 升溶液。

  1. 麻醉过量的处理 麻醉过量时,可按麻醉剂的不同、过量的程度,采取不同的处理。如动物呼吸极慢而不规则,但血压和心搏仍正常时,可施行人工呼吸,并给苏醒剂。若动物呼吸停止、血压下降,但心搏仍可摸到时, 应迅速施行人工呼吸,同时注射 50% 温热葡萄糖

溶液 5-10ml,并给肾上腺素及苏醒剂。若动物呼吸停止、心搏极弱或刚停止时,应使用 5% CO2 和 60%O2 的混合气体进行人工呼吸,同时注射温热葡萄糖溶液、肾上腺素和苏醒剂,必要时可打开胸腔直接按摩心脏。常用的苏醒剂有咖啡因、苯丙胺、印防己毒素和可拉明等。

(三)动物的固定 急性在体实验的手术过程中,必须将麻醉动物稳妥地加以固定,以限制动物的活动,保证实验或手术的顺利进行。一般使用各种动物的头夹和固定绑带将动物固定于手术台上,但随手术部位和实验内容的差别,动物的固定方法也不相同。生理学实验中最常使用的动物固定方法有两种:背位(仰卧位)固定法和腹位(俯卧位)固定法,其中关键性的固定部位是头部和四肢。

  1. 背位固定法 将动物的背部直接接触手术

台的固定方法。在呼吸、循环、消化、泌尿等实验中均采用此法。各类哺乳动物(兔、狗、猫等)的背位固定法大同小异,现以兔为代表加以说明。

  1. 头部的固定 头部的固定通常使用头夹(图 1-16),有兔头夹、猫头夹和狗头夹之分。使用时可将相应的头夹固定于手术台前端的直棒上,然后将已麻醉的动物背位置于手术台上。兔头的固定是将兔头夹的半圆铁圈由背部夹持于动物的颈部,然后将金属圆铁圈适度地套紧兔嘴,旋紧螺丝,加以固定(图 1-17),但不可过分压迫鼻部,以免影响呼吸。狗头夹为一较大的圆铁圈,圈内上部有一直铁棒,其上有一半圆铁圈,均可上下移动,固定时把狗舌拉出,将狗的嘴鼻部插入圆铁圈内,半圆铁圈的下方,再将直铁棒插入上下颌之间,犬齿之后,加以固定,然后旋动螺旋,将半圆铁圈下移, 适度地压在动物的鼻梁上。若无动物头夹,也可取线绳代替,即将线绳拉紧动物的门齿,固定于手术台前端的直棒上,方法简便易行,也可达到固定头部的目的。

  2. 四肢的固定 在头部固定之后,即可固定四肢。四肢用绑带固定, 先将绑带按图 1-17 打结,再进动物前肢的腕关节和后肢踝关节,将绑带收紧,后肢的绑带可直接拉紧分别扎于手术台两侧的木钩上。除特殊要求外, 前肢的固定方法应为:将两前肢平放在胸部的两侧,再把捆绑前肢的两条绑带从动物背部交叉穿过,并压在对侧前肢的前臂上,最后拉紧绑带,固定于手术台两侧的木钩上(图 1-17)。这样可将动物稳妥地固定于手术台上。

  1. 腹位固定法

    是动物的腹部直接接触手术台的固定方法。这种固定法适用进行脑脊髓的实验。兔、猫头部的固定常用马蹄形头固定器(图 1-18)。其方法是在两侧眼眶下部剪去一小块毛皮,暴露颧骨突,用带 1mm 钻头的骨钻打一小孔,将固定器两侧的尖头金属棒紧紧嵌入小孔内,加以固定,再调节固定器中间的金属棒的高度,使其尖端紧嵌在两门齿缝之间,旋紧螺旋固定之。如果需要头部上仰,可提高固定器前端的垂直铁柱;如需头部下俯, 可将该铁柱放低。

动物四肢的固定同前,用绑带缚紧后直接拉紧固定于手术台两侧的木钩上,前肢的绑带可不进行交叉。

  1. 蛙类的固定法

    蛙和蟾蜍的固定法也分背位和腹位两种。规范的固定方法是使用蛙腿夹和蛙板,方法较简单。将蛙腿夹套在蛙四肢的腕关节或踝关节处,拉紧四肢插入蛙板上的

小孔内即可(图 1-19)。如无这些器材,可用大头针将四肢直接钉在木板上。蛙类头部活动不大,一般不作特殊固定。

(四)急性动物实验的基本操作技术

1、手术切口与止血 在哺乳动物体上行皮肤切口之前,需将切口部位及其周围的毛剪去。剪毛应使用剪毛剪,持剪方法同一般手术剪。剪毛时,应将剪毛剪的凸面贴近皮肤,依次剪毛,切忌提起毛剪,以免剪及皮肤。剪下的毛应放入污物筒内,以免到处飞扬,污染环境。做切口前,应注意切口的大小和解剖结构,一般以少切断神经和血管为原则,同时应尽可能地使切口与各层组织的纤维方向一致。切口的大小,既要便于手术操作,但也不可过大。做切口时,先用左手拇指和食指、中指将预定切口上端两侧的皮肤固定, 右手持手术刀,用执弓式或执笔式,以适当的力量,一次全线切开皮肤和皮下组织,直至肌层。

手术过程中,要随时注意止血。以免造成手术野血肉模糊,难以分辨血

管和神经,延误手术时间。止血方法 第一步:作第一个单结视出血情况而定。微小血管出血,可用湿热生理盐水纱布按压止血;较大血管出血,需先找到出血点,用止血钳夹住,而后用线结扎;大血管破损,应准确、快速止血,否则失血过多,影响实验。实验期间,应将创口暂时闭合,或用温热生理盐水纱布盖好,以免组织干燥。

2、手术结 手术结不仅是外科

手术上的重要技术,也是急性动物实验中的基本技术。手术结有多种, 如单结、方结、外科结、脱结、十字结、三叠结等,其中以方结和三叠结最为安全可靠。在生理学实验中,又以方结最为常用,打结的方法有单手打结法、双手打结法和持钳打结法几种。单手打结法(图 1-20,1-21)最为方便, 但结线必须留得长些。

图 1-22,1-23 为持钳打结法。这种打结法适用于结线太短或结扎部位过深等情况。总之,打结是一种基本技术,在动物实验中经常使用,要经常练习,熟练掌握。

3、颈部手术

  1. 气管分离术 将动物背位固定,剪去颈部腹面的毛,用手术刀在紧靠喉头下部沿颈部正中线切开皮肤。切口长度:兔、猫约 5-7cm;狗约 10cm; 大白鼠或豚鼠的 2.5-4cm。在气管正腹面用手或止血钳分层分离皮下结缔组织,即露出胸骨舌骨肌。此肌起于胸骨,止于舌骨体,位于颈腹面正中线, 覆盖于气管腹面。用止血钳由正中线将胸骨舌骨肌分开,即可

  2. 颈外静脉分离术 哺乳动物的颈外静脉壁薄粗大,且分布很浅。位于颈部皮下、胸骨乳突肌(狗为胸头肌)外缘。分离该静脉时,可用左手拇指与食指捏住切口一侧的皮肤,再向外翻,可将暗紫色的粗大静脉翻于食指上。用玻璃解剖针或细止血钳由静脉外侧分离结缔组织,即可将颈外静脉分离出来,然后穿线备用。

  3. 颈总动脉分离术 颈总动脉位于气管外侧,腹面被胸骨舌骨肌和胸骨甲状肌所覆盖。分离时,可用左手拇指和食指捏住已分离的气管一侧的胸骨肌,再稍向外翻,即可将颈总动脉以及神经束翻于食指上。用玻璃解剖针或止血钳轻轻分离动脉外侧的结缔组织,便可将颈总动脉分离出来,最后穿线备用。注意:颈部神经与颈总动脉被结缔组织包绕在一起,形成血管神经束。在分离动脉时,应注意神经的部位与走行,切勿伤及与其伴行的神经。

  4. 神经分离术 在分离颈总动脉的基础上,提起动脉,即可看到粗细不同的神经,用玻璃解剖针小心分离其外的结缔组织,一般分离出 2cm 即可穿线备用。颈部的神经分布因动物的种类而不同,以下介绍常用实验动物兔、猫和狗颈部神经的特点。兔颈部的血管神经束内有 3 条粗细不同的神经,其中迷走神经最粗,呈白色,一般位于外例;交感神经稍细,略呈灰色,一般位于内侧;减压神经最细,位于迷走神经与交感神经之间,减压神经属于传入性神经(参见图 4-17)。猫的迷走神经与交感神经并行,迷走神经较粗, 交感神经较细,减压神经并入迷走神经中。狗在颈总动脉背外侧有一条粗大的迷走交感干,迷走神经的结状神经节与交感神经的颈前神经节相邻。迷走

神经从第 1 颈椎下面进入颈部,与交感神经干并行,被一结缔组织鞘所包绕, 形成迷走交感干,在进入胸腔后,两神经才分开、移行。

  1. 腹部手术

    在动物实验中,腹白线是腹部切口的常用部位。腹白线是位于腹中线下面的白色健膜线,从胸骨的剑突隆起直至耻骨联合。腹白线为较宽的结缔组织间层,神经血管分布极少。因此,通过腹白线所作的腹正中切口,不伤及肌肉、神经和血管,对动物损伤较小,较少出血。腹正中切口的长度因实验的要求和动物的种类而不同。如在观察兔胃和小肠运动的实验中,需在胸骨剑突下方作 8-10cm 的切口,才能充分暴露胃和小肠。而在兔尿形成的调节实验中,只需自耻骨联合向前作 2-3cm 的切口,即可将膀胱引出。

兔左侧内脏大神经的分离可通过腹部,也可通过背部,这里仅以前者加以说明。将兔背位固定,剪毛,沿腹白线由剑突向后作 8-10cm 的腹正中切口。以温热生理盐水纱布包住胃肠道,并推向右侧。在左侧腹腔后壁找到左肾, 在肾脏上方,紧贴腹主动脉与左肾动脉夹角的上方,可见一杏黄色肾上腺。用止血钳分离肾上腺附近的脂肪组织,并向肾上腺斜外上方分离,在腹膜下隐约可见一乳白色的细神经

与腹主动脉并行,此即为内脏大神经。它由肾上腺外上方通向肾上腺,并在通向肾上腺前形成两条分支,分支交叉处略膨大,此即为腹腔神经节。小心分离内脏大神经,并穿线备用。5.股部手术 股部血管与神经在动物实验中也较常用,如插入心导管、测压、注射和采血等,股部血管和神经在股三角处通过。股三角为股部手术的常用部位。股三角是指耻骨肌与缝匠肌后部的后缘之间所形成的三角区。在股三角内,有股动脉、股静脉和股神经通过。血管与神经分离术:将动物背位固定,先用手指在股部内侧面根部触摸

动物搏动部位,剪去该部位的被毛,用手术刀沿血管平行方向作一 4-5cm 切口。用止血钳分离皮下结缔组织,再将耻骨肌和缝匠肌的交点处分离,并将缝匠肌后部向外拉开,其下方可见筋膜包绕的神经血管束(图 1-24)。用蚊式止血钳细心分离其结缔组织膜,即可将血管和神经分离出来,并穿线备用。血管神经的自然位置为,股静脉位于内侧,股神经位于外侧,股动脉位于两者之间。

(五)采血技术 由于实验动物不同,实验需要和采血数量有别,所选用的采血方法也不相同。这里仅介绍几种实验动物的常用采血技术。

  1. 兔和豚鼠
  1. 心脏采血 将兔或豚鼠背位固定,剪去左侧胸部相当于心脏部位的被毛,用碘酒和酒精消毒皮肤,选择心脏跳动最明显处作穿刺。一般由胸骨左缘外 3mm 处刺入兔的第三肋间隙;在豚鼠,则刺入第 4-6 肋间隙。穿刺时, 最好用左手触诊心脏,以作配合。当针头接近心脏时,就会感到心脏的跳动。这时需将针头再向里穿刺,便可进入心室。由于心脏的搏动,血液会自然进入注射器。如认为针头已进入心脏,但抽不出血液,可把针头稍微退出或进入一点。心脏采血经 6-7 天后,可以重复进行。采血量:在兔一次可取血液20-25ml,在豚鼠可取 6-7ml 血液。

  2. 兔耳中央动脉采血 将兔置于兔固定箱内,用酒精棉球擦揉兔耳片刻,使其充血。在兔耳中央有一条纵行、较粗、颜色鲜红的中央动脉。用左手固定兔耳,右手持注射器,在中央动脉的末端,沿动脉平行地向心方向刺入动脉,轻轻抽动针筒,即可见血液进入注射器。一次可采血约 15ml(采血

后应注意止血)。采血一般使用 6 号针头,不可太细。需加注意的是,兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩,因此,采血前必须使兔耳充血。当动脉扩张, 未发生痉挛性收缩前立即进行抽血,时间过长,动脉会发生较长时间的收缩, 采血难以进行。

此外,兔和豚鼠还可采用股静脉、颈静脉、股动脉、颈总动脉采血,一般需行动、静脉分离术,而后采取。

  1. 小白鼠和大白鼠
  1. 颈静脉或颈动脉采血 将鼠麻醉后背位固定于手术台上,剪去一侧颈部外侧的被毛,作常规颈静脉或颈动脉分离术。用注射器针头沿血管平行方向刺入,抽取所需血量。此法采血量:体重 20g 小白鼠可采血 0.6ml 左右; 体重 300g 大白鼠可采血 8ml 左右。同法也可选用股动脉或股静脉采血。

  2. 尾静脉采血 将鼠放入固定筒内,露出鼠尾。用手揉擦或用温水(45

—50℃)加温鼠尾,也可用二甲苯等涂擦鼠尾,使尾静脉充血。用剪刀剪断尾尖(小白鼠 1—2mm,大白鼠约 5—10mm)后,即可流出血液。如血流不畅, 可用手轻轻从尾根部向尾尖部挤压数次,可取到数滴血液。

如实验需要间隔一段时间而多次采血时,每次采血可将鼠尾剪去很小一段。采血后,用棉球压迫止血,并立即用 6% 液体火棉胶涂于尾部伤口处, 使之结一层火棉胶薄膜,以保护伤口。

此外,也可采用尾静脉交替切割法进行间隔、多次性采血。方法是用锋利手术刀片在尾部切一小口,切破一段尾静脉,血液即由伤口流出(图 1-

25)。此法每次可采 0.3—0.5 ml 血液,可供—般血常规实验。尾部的 3 条静脉可交替切割,并由尾尖部向尾根部逐次切割,以保证连续多次使用。切割后用棉球压迫止血,约 3 天后即可结痂痊愈。此法在大白鼠采血时较为常用,效果较好。

  1. 眼眶后静脉丛采血 先制作硬质玻璃吸管,管长 7-10cm,一端管径为 0.6 mm,壁厚为 0.3mm 的毛细管,另一端逐渐扩大呈喇叭形。采血部位是眼球和眼眶后界之间的眼眶后

静脉丛。采血时,用左手从背部捉住动物,以食指和拇指握住颈部,利用对颈部所加的轻压力,使头部静脉血液回流困难,眼球充分外突,以辨认眼眶后静脉丛(图 1-26)。右手持消毒的吸管,将其尖端插入内侧眼角,并轻轻由鼻侧眼眶壁

平行地对着喉头方向推进,约 4—5mm 即达眼眶后静脉

丛。把玻璃吸管取水平位,稍加吸引,血液即流入吸管。

为防止血液凝固,采血前可用 1%肝素溶液湿润吸管内壁。采血后,将吸管拔出,同时放松左手使出血停止。用此采血法一次可采取小白鼠血液0.2ml,大白鼠血液 0.5ml,一般不发生术后穿刺孔出血或其它合并症。还可根据实验需要,于数分钟后在同一穿刺孔重复采血。除小、大白鼠外,豚鼠和兔也可从眼眶后静脉丛采血。

  1. 狗和猫 狗、猫的采血可用前、后肢皮下静脉。

其基本方法与静脉注射法相同(参见图 1-12)。需加注意的是抽血时速度要慢,以防针口吸着血管壁。此法一般可抽取 10—20ml 血液。此外,还可采用颈静脉、颈动脉、股动脉取血,基本方法见颈部手术和股部手术。如实验需要抽取大量血液,可用心脏采血法,其方法与兔的心脏采血略同。

  1. 鸽、鸡和鸭
  1. 翼根静脉采血 鸽和鸡常采用翼根静脉采血法。采血时,可将翼部展开,露出腋窝部,将羽毛拔去,即可见到明显的翼根静脉。由助手将动物固定,用碘酒、酒精消毒皮肤。用左手拇指、食指压迫此静脉的近心端,使

血管怒张。右手持连有5 1 号针头的注射器,由翼根部向翅方向沿静脉平行

2

刺入血管,即可抽取血液(图 1-27)。

  1. 翼下肱静脉采血 鸭可从翼下肱静脉采血。采血时,将鸭背位固定于手术台上,剪去翼下靠躯干的羽毛,残留的绒羽可用手拔去。在靠近躯干部的翼下可见到皮下有一条深蓝色的肱静脉,便可用注射器由此处采血。

(六)动物的处死方法

1.脊椎脱臼法 用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部,并用力下压,右手抓住鼠尾,用力向后上方拉,即可使颈椎脱臼,瞬间死亡(图 1-28)。 2.空气栓塞法 向动物静脉内注入一定量的空气,使之发生栓塞而死亡。

狗、猫、兔、豚鼠均可用此法处死。兔一般选用耳缘静脉,狗由前肢或后肢皮下静脉注射。兔、猫等静脉内注入 20—40ml 空气、狗注入 80—150ml 空气即可致死。

3.放血致死法 轻度麻醉动物后,固定于手术台上。行股部手术,暴露股三角区。分离股动脉,并插一根塑料管。打开动脉夹,使血液流入容器内。一般动物 3—5min 内即可致死。除股动脉外,常用选用颈总动脉放血。此法处死动物较为安静,对内脏器官无损伤,是采集病理切片标本、同时采集血液的一种较好的方法。狗、兔、猫等均可采用此法处死。

(解景田)