例 2.葡萄脱病毒苗的生产

从葡萄园中采取刚萌芽的茎尖（1～2 厘米），用 1.2％次氯酸钠+ 0.1

％“吐温 20”表面消毒灭菌 10 分钟，用无菌水冲洗 3 次，在超净工作台上， 双筒解剖镜下进行仔细剥离。用自制的解剖针（最细的绣花针固定在玻棒上即可）效果较好，剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用自制的解剖刀（取双面刀片的一部分固定在玻棒上）仔细切取所需的茎尖，随即接种于培养基中。茎尖为 0.5～1 毫米，带 1～2 个叶原基；培养基为 MS 配方，加入大量元素、微量元素、甘氨酸和维生素，加入 3％蔗糖，0.8％琼脂，pH 调为 5.8，0.1mg/L 的萘乙酸和 1.0mg/L 的 6 苄基腺嘌呤。

热处理是将上述接种的茎尖，立即放置于 27℃，光照 15 小时加 35℃， 黑暗 9 小时的条件下培养，经 7 天热处理后，转移至 25℃下，光照 15 小时

的条件下培养。经过 21 天的培养，茎尖生长，出现小叶片，成为 2 厘米左右的小茎段。

在培养至 18、21、25、31 天时分别取样，在 6kV 加速电压的 PSEM500 型扫描电子显微镜下观察制备的新叶片细胞中是否含有病毒。在确认已脱病毒后，应用快速繁殖侧芽生长的技术，大量繁殖脱病毒葡萄苗。

葡萄的快速繁殖侧芽使用的培养基配方为 MS+1.0mg/L 6-苄基腺嘌呤

+1.0％mg/L 吲哚乙酸。当侧芽长到一定数量后，将切段转移到诱导生根的培养基中，即 1/2 MS＋0.1mg/L 6-苄基腺嘌呤+1. 0 mg/L 的萘乙酸。

形成根系的葡萄试管苗，经 20 天左右生长，具有 5～8 张叶片的小植株。此时可将培养温度降至 20℃，光照强度增加到 500 勒克斯以上，同时打开盖

子，进行 5～7 天的炼苗。

炼苗后进行移苗，小心洗去根系琼脂，将小苗移到以锯末为支持基质的苗床上，用 1/10 的 MS 液体培养基浇苗，并覆盖塑料薄膜进行保湿，昼夜温度 15～25℃，避免阳光直射。当小苗长出 2～3 张幼叶时，可用稀人粪尿+10

％尿素施肥，25～40 天后可投放市场。为防止移苗过程中被病毒媒介再侵染，应在苗床四周布置昆虫网，防止昆虫的叮咬。

茎尖培养加热处理进行葡萄脱病毒苗生产，其脱病毒率可高达 90%以上。