无菌培养物的建立

要选择合适的外植体（用于组织培养的植物材料），主要有芽（顶芽为主）、叶片、带芽的茎切段等。取得的外植体首先要进行消毒灭菌工作：用自来水冲洗干净→吸水纸吸干表面水分→70％酒精浸 5～10 秒→无菌水冲洗

→2％～10％的次氯酸钠溶液浸泡 6～15 分钟→无菌水冲洗三次→接种于培养基上。

培养基是组织培养成功与否的关键，不同的培养目标可选择不同的培养基。常见的有 MS、LS、B5、Nitsch、White 等培养基，它们的主要成分可分为五大类：

①无机营养物，有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、锌、钼、铜、钻等矿质元素，相当于日常植物栽培中的肥料所含的物质；②碳源，主要有蔗糖、葡萄糖、果糖等，相当于光合作用所生产的营养物质；③维生素，它们有利于离体培养物的发育，有维生素 B1、维生素 B6、生物素、烟酸、肌醇芽；④有机附加物，有橄子汁、果汁、琼脂等；⑤生长调节物质，主要有生长素和细胞分裂素，它们的比例调节着培养物的生长与分化方式，当生长素和细胞分裂素比例低时，有利于芽的生长与分化，当其比例高时，有利于根的诱导。

培养基配制好后，装在三角烧瓶或试管等玻璃容器中，加上棉花塞（或铝铂纸）后进行高压灭菌。高压灭菌一般在高压锅内进行，在 120℃，1.1 公斤/厘米 2 压力下，保持 15～20 分钟。灭菌后的培养基可用于接种培养物， 或在 10℃下保存备用。

灭菌后的外植体在无菌箱（或超净工作台）上接种到灭菌后的培养基上， 然后放置于培养室中培养。培养过程要求一定的光照时间（如 16 小时/天）、光照强度（2000～5000 勒克斯）和温度（20～30℃）。不同的植物，不同的培养目的对培养条件的要求不同。